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学生用入书名师导学·选择性考试第一轮总复习·生物②利用序列数据库和序列比对工具进行4.目的基因的检测与鉴定筛选。检测检测目的检测方法(3)目的基因的获取水平利用PCR获取和扩增目的基因。目的基因是否插入到转基因生物染色体2.基因表达载体的构建—一基因工程的DNA上核心分子水平目的基因是否转录出(1)目的:使目的基因了mRNA,同时,使目目的基因是否翻译出的基因能够表达和发挥作用。蛋白质(2)基因表达载体的组成及作用个体转基因生物是否表现如抗虫、抗病的接种水平出相应的特性实验目的基因:编码蛋白质的基因或具有调控作用的因子5.DNA的粗提取与鉴定表达载体:RNA聚合酶识别和结合的部位(1)原理复制原点终止子:转录的终点,在转录过程中起调控作用DNA酒精,某些蛋白质溶于:供重组DNA分子的筛选酒精→初步分离DNA和蛋白质3.将目的基因导入受体细胞DNA能溶于物质的量浓度为生物种类植物动物微生物的NaCI溶液-一→溶解DNA常用、农杆一定温度下,DNA遇试剂呈显微注射法方法菌转化法处理法现蓝色→鉴定DNA受体体细胞或受精卵受精卵原核细胞(2)方法步骤细胞研磨材料一新鲜洋葱,加液充分研磨花粉管通道法:用将含有目的基获取含DNA因的DNA溶液直接注入Ca+处理的滤液过滤(纱布)、提取滤液;或离心取子房中;也可以在植物受将含有目的细胞→细在上清液中加入体积分数为的冷酒粉后一定时间内,剪去柱基因的表达DNA的析出精,静置后用玻璃棒沿搅拌卷胞处于一头,将DNA溶液滴加在载体提纯→起白色丝状物,或离心取沉淀物种能吸收花柱切面上,使目的基因取卵(受精转化周围环境「将丝状物或沉淀物溶解在的NaCl借助花粉管通道进人卵)→显微溶解DNA过程中DNA分溶液中胚囊注射→受精子的生理农杆菌转化法:将目的基卵发育→获在溶有DNA的溶液中加入试剂,状态→基因插人Ti质粒的T-得具有新性DNA的鉴定混合均匀后将试管在沸水中加热因表达载溶液变成DNA中→农杆菌→导人状的动物体导人植物细胞→整合到受体6.DNA片段的扩增及电泳鉴定细胞的染色体DNA上表达(1)原理①PCR原理:DNA热变性原理。双链DNA加热、双螺旋结构解体缓慢冷却,分离的DNA链又重新结合单链DNA400
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